Получение хлорофилла в лабораторных условиях.

Лабораторная работа No 7.
Изучение свойств фотосинтетических пигментов
Цель работы: ознакомиться с методами экстракции пигментов и с их
химическими свойствами.
Задание 1. Химические и оптические свойства пигментов листа
В процессе фотосинтеза высших растений участвуют две группы пигментов: зеленые – хлорофиллы а и b; желтые – каротины и ксантофиллы. Мы познакомимся с методом выделения пигментов, разделения по методу Крауса, с основными химическими и оптическими свойствами пигментов. Работа состоит из отдельных этапов, которые выполняют в приведенной ниже последовательности.

1. Получение спиртового раствора пигментов
   С этой целью можно использовать как сухие листья, так и свежий растительный материал. При работе с сухими листьями рекомендуется увлажнить их перед экстракцией пигментов. При работе с сырым материалом удобны листья герани, гороха, фасоли.
   Для получения большого объема экстракта употребляют высушенные листья крапивы, которые помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл и обваривают кипятком, затем воду сливают. В колбу приливают 100 мл этилового спирта, закрывают ее пробкой с обратным холодильником и ставят на 5 минут на баню с кипящей водой для экстрагирования пигментов. Затем содержимое колбы охлаждают и раствор осторожно декантацией сливают через воронку со складчатым бумажным фильтром. Отфильтрованный раствор используют в последующих опытах. Хранить растворы пигментов следует в темноте в холодильнике.
   Ход работы: 1–2 г листьев герани поместить в фарфоровую ступку, добавить немного кварцевого песка (для лучшего измельчения растительных тканей) и щепотку мела (для создания нейтральной или слабощелочной реакции среды). Листья растереть до однородной массы, в которую добавить 10–15 мл 96%-ного этанола. После тщательного перемешивания гомогенат отфильтровать в пробирку через бумажный фильтр с белой лентой. Чтобы жидкость при выливании из ступки не стекала по стенке, приставить стеклянную палочку к носику ступки, смазанному снаружи вазелином. Ступку и пестик можно ополоснуть несколькими миллилитрами этанола, который надо сливать на этот же фильтр. Работа носит качественный характер; поэтому можно не добиваться полного переноса пигментов в раствор. Если первые порции фильтрата получились мутными, их снова надо профильтровать, не меняя фильтра. Полученный экстракт зеленого цвета пригоден для последующих опытов.
2. Разделение пигментов по методу Крауса
   Метод основан на различной растворимости пигментов в спирте и бензине, которые при сливании не смешиваются, образуя два слоя: верхний – бензин; нижний – спирт. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Хлорофилл является сложным эфиром дикарбоновой кислоты хлорофиллина и двух спиртов – метанола и фитола. Фитол имеет длинную углеводородную цепочку (С20Н39), которая и определяет гидрофобность молекулы хлорофилла. Он лучше растворяется в гидрофобном растворителе – бензине. Каротин, будучи углеводородом (С40Н56), также обладает гидрофобными свойствами и имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы – спирты (С40Н56О2), и поэтому они лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 1 из 4 Ход работы: в пробирку налить 2–3 мл спиртовой вытяжки пигментов и добавить 3–4 мл бензина Калоша (вместо бензина можно использовать петролейный эфир). Пробирку встряхнуть и дать отстояться содержимому. Происходит отслоение эмульсии. Сверху собирается бензин с перешедшими в него хлорофиллами, которые окрашивают данный слой в зеленый цвет. Каротин также находится в бензине, но его желтая окраска маскируется хлорофиллом. Нижний спиртовой слой содержит пигмент ксантофилл, который окрашен в желтый цвет.
   Если разделение пигментов происходит недостаточно четко, в пробирку надо добавить 1–2 капли воды и снова сильно встряхнуть ее. Избытка воды следует избегать, так как может произойти помутнение раствора.
   Результат работы зафиксировать в виде рисунка.
   В заключение следует дать объяснение различной растворимости пигментов в спирте и бензине.
3. Омыление хлорофилла щёлочью
   Сложные эфиры способны к реакции со щелочью (реакция омыления), при этом их молекула расщепляется на кислоту и спирт. Из пигментов листа омыляется только хлорофилл, от молекулы которого под влиянием щелочи отщепляются метанол и фитол:
   Образующаяся при омылении натриевая соль хлорофиллиновой кислоты сохраняет зеленую окраску, но приобретает гидрофильные свойства, а значит, и большее сродство к спирту. Желтые пигменты при действии щелочи не изменяют своей химической природы.
   Ход работы: в пробирку с 2–3 мл вытяжки пигментов добавить 1–2 капли 20%-ного раствора NaОН. Пробирку нагреть на водяной бане до закипания в ней раствора. После охлаждения добавить в пробирку 2–3 мл бензина и 2–3 капли воды (для лучшего разделения смеси). Затем содержимое пробирки сильно встряхнуть и дать отстояться. В пробирке должны присутствовать два слоя: нижний (спиртовый), окрашенный в зеленый цвет; верхний (бензиновый), окрашенный в желтый цвет. В спиртовом слое растворены натриевая соль хлорофиллиновой кислоты и ксантофиллы, окраска которых маскируется хлорофиллом. В бензиновом слое растворен каротин.
   В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.
   В заключение необходимо объяснить распределение окраски в спиртовом и бензиновом слоях.
4. Получение феофитина и обратное замещение водорода атомом металла
   Хлорофилл относится к Mg-порфиринам. Главной частью его молекулы является порфириновое ядро, состоящее из четырех пиррольных колец.
   Их вершины с атомами азота направлены к центру порфиринового ядра и взаимодействуют с атомом магния, занимающим центральное положение. Магний в порфириновом ядре удерживается непрочно и при осторожном воздействии сильных кислот может быть замещен на два атома водорода.
   Водородзамещенный хлорофилл называется феофитином и имеет бурый цвет:
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 2 из 4 Водород феофитина можно заменить снова металлом, если подействовать солями меди или цинка; при этом восстанавливается зеленая окраска пигмента. Следовательно, цвет хлорофилла зависит от наличия металлорганической связи в молекуле.
   Процесс феофитинизации часто наблюдается в природе и свидетельствует об увеличении проницаемости живых мембран, а значит, о повреждении и гибели клеток.
   Ход работы: в две пробирки налить по 2–3 мл спиртового раствора пигментов и прибавить по одной-две капли 10%-ной соляной кислоты. Зеленая окраска раствора переходит в бурую, так как образовался феофитин. Одну пробирку оставить для контроля, во вторую внести небольшой кристаллик уксуснокислой меди и нагреть раствор на водяной бане до кипения. Бурый цвет раствора изменится на зеленый, так как произошло образование хлорофиллпроизводного меди:
   В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.
   В заключение необходимо объяснить изменение окраски.
   Задание 2. Разделение фотосинтетических пигментов методом бумажной хроматографии
   Разделение пигментов в настоящем задании основано на различной скорости их продвижения с растворителем. Это обусловлено различной адсорбцией пигментов на бумаге и частично – разной растворимостью в бензине и массой молекул. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Каротин (С40Н56) имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы (С40Н56О2) лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.
   Ход работы: приготовить ацетоновую (или спиртовую) вытяжку из свежих листьев любых растений. Навеска растительного материала должна составлять 2–3 г, объем ацетонового экстракта – 25 мл (100%-ный ацетон).
   Из хроматографической бумаги вырезать полоску шириной 1,5–2,0 см, длиной 20 см. Держа полоску вертикально, опустить ее кончик на несколько секунд в вытяжку пигментов, налитую в бюксу. При кратковременном погружении вытяжка поднимается по бумаге на 1–1,5 см.
   Затем бумагу высушить в токе воздуха и снова погрузить в раствор пигментов. Эту операцию повторить 5–7 раз, пока у верхней границы не образуется полоска ярко-зеленого цвета. После этого нижний конец хроматограммы опустить на несколько секунд в чистый ацетон, чтобы все пигменты поднялись на 1–1,5 см. Таким образом, на бумаге получают окрашенную зону в виде зеленой полоски, где сконцентрирована смесь пигментов, которую необходимо разделить.
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 3 из 4 Рис. 1. Вид хроматограммы с разделенными пигментами
   Хорошо высушенную хроматограмму (до исчезновения запаха ацетона) поместить в строго вертикальном положении в камеру, на дне которой находится чашка Петри с растворителем (смесь бензин:бензол – 1:2), так, чтобы растворитель не касался зоны пигментов. Камеру герметично закрыть. Через 10–15 мин растворитель поднимется на 10–12 см. Смесь пигментов при этом разделится на отдельные компоненты в виде полос, расположенных в следующем порядке: первый снизу – хлорофилл b, над ним – хлорофилл a, затем – ксантофилл (рис. 1). Каротин продвигается вместе с фронтом растворителя быстрее других компонентов, и зона его на бумаге располагается выше всех других пигментов.
   Полученную хроматограмму приклеить в тетрадь, обвести зоны пигментов карандашом и подписать.
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 4 из 4

Реклама

Роль коэнзим Q10 в #DETOX_LONGEVITY

В тот момент, когда вы откроете интернет и сделаете запрос : «коэнзим Q10”, сразу же, практически с первой минуты, вы увидите информацию, что Израиль, Япония и страны Европы рассматривают это вещество, как перво-очередное средство для профилактики сердечных болезней.

И это так! Но ради справедливости следует заметить, что это вещество работает намного шире, и процессы, которые коэнзим Q10 выравнивает, очень сильно влияют на качество и продолжительность жизни. Об этом и статья!

Рассмотрим понятие — кислородная емкость крови и митохондриальная дисфункция.

КАВАНТУ Жозеф Бьенеме. Рубрика: «История прогресса. Имена.»

КАВАНТУ Жозеф Бьенеме

Имя латиницей: Caventou Joseph Bienaime

Пол: мужской

Дата рождения: 30.06.1795

Место рождения: Сент-Омер, Франция

Дата смерти: 05.05.1877 Возраст (81)

Место смерти: Париж, Франция

Ключевой год: 1834

Жозеф Бьенеме КАВАНТУ

французский химик и токсиколог.

 Окончил Высшую фармацевтическую школу в Париже (1815). 

С 1816 г. работал в лаборатории госпиталя святого Антония, 

в 1826-1859 гг. преподавал в Высшей фармацевтической школе в Париже (с 1834 г. – профессор) и одновременно руководил аптекой. 

Основные научные работы  –.  в области химии природных соединений и фармацевтической химии. Долгое время сотрудничал с П. Ж. Пельтье. 

Они изучали (1817) зеленый пигмент листьев и назвали его хлорофиллом; выделили кретоновую кислоту из кретонового масла (1818) и амбреин из амбры (1820); исследовали (1820) кармин — красящее вещество кошенили. Однако главные их достижения с экстрагированием алкалоидов из растений: они выделили стрихнин (1818), бруцин и верантин (1819), цинхонин и хинин (1820), кофеин (1821, независимо от П. Ж. Робике).

Как открыли хлорофилл?

В 1817 году

ПОДРОБНЕЕ https://mydetoxproes.com/2019/07/07/каванту-жозеф-бьенеме-рубрика-истор/

 

КАВАНТУ Жозеф Бьенеме и Пеллетье Пьер Жозеф выделили из листьев растений зелёный пигмент, который они назвали хлорофиллом^[1].

В 1900-х годах 

Михаил Цвет^[2]

 и Рихард Вильштеттер

независимо обнаружили, что хлорофилл состоит из нескольких компонентов. Вильтштеттер очистил и кристаллизовал два компонента хлорофилла, названные им хлорофиллами а и b и установил брутто-формулу хлорофилла а. В 1915 году за исследования хлорофилла ему была вручена Нобелевская премия. В 1940 Ханс Фишер, получивший в 1930 Нобелевскую премию за открытие структуры гема, установил химическую структуру хлорофилла a. Его синтез был впервые осуществлен в 1960 Робертом Вудвордом^[3], а в 1967 была окончательно установлена его стереохимическая структура^[4].

Лабораторное получение хлорофилла

В этой статье помещаю описание лабораторной работы для студента вуза по биохимии. Мне было интересно вспомнить студенческие годы. А кроме этого, люблю изучать вопрос с разных сторон.

Хлорофилл с 1960 года научились синтезировать 1 в 1, вплоть до пространственной конфигурации молекулы. (об этом будет отдельная статья, позже помещу ссылку или ищите в рубрике ИСТОРИЯ. ИМЕНА.)

Но меня, как врача, радует, что его так легко получать из растительного сырья. Значит этот великолепный препарат всегда будет доступен нам для DETOX и ANTI-AGE терапии в своём самом лучшем, натуральном, БИО-ДОСТУПНОМ виде!

Лабораторная работа № 7.

Изучение свойств фотосинтетических пигментов

Цель работы: ознакомиться с методами экстракции пигментов и с их химическими свойствами.

Задание 1. Химические и оптические свойства пигментов листа

В процессе фотосинтеза высших растений участвуют две группы пигментов: зеленые – хлорофиллы а и b; желтые – каротины и ксантофиллы. Мы познакомимся с методом выделения пигментов, разделения по методу Крауса, с основными химическими и оптическими свойствами пигментов. Работа состоит из отдельных этапов, которые выполняют в приведенной ниже последовательности.

1. Получение спиртового раствора пигментов

С этой целью можно использовать как сухие листья, так и свежий растительный материал. При работе с сухими листьями рекомендуется увлажнить их перед экстракцией пигментов. При работе с сырым материалом удобны листья герани, гороха, фасоли.

Для получения большого объема экстракта употребляют высушенные листья крапивы, которые помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл и обваривают кипятком, затем воду сливают. В колбу приливают 100 мл этилового спирта, закрывают ее пробкой с обратным холодильником и ставят на 5 минут на баню с кипящей водой для экстрагирования пигментов. Затем содержимое колбы охлаждают и раствор осторожно декантацией сливают через воронку со складчатым бумажным фильтром. Отфильтрованный раствор используют в последующих опытах. Хранить растворы пигментов следует в темноте в холодильнике.

Ход работы: 1–2 г листьев герани поместить в фарфоровую ступку, добавить немного кварцевого песка (для лучшего измельчения растительных тканей) и щепотку мела (для создания нейтральной или слабощелочной реакции среды). Листья растереть до однородной массы, в которую добавить 10–15 мл 96%-ного этанола. После тщательного перемешивания гомогенат отфильтровать в пробирку через бумажный фильтр с белой лентой. Чтобы жидкость при выливании из ступки не стекала по стенке, приставить стеклянную палочку к носику ступки, смазанному снаружи вазелином. Ступку и пестик можно ополоснуть несколькими миллилитрами этанола, который надо сливать на этот же фильтр. Работа носит качественный характер; поэтому можно не добиваться полного переноса пигментов в раствор. Если первые порции фильтрата получились мутными, их снова надо профильтровать, не меняя фильтра. Полученный экстракт зеленого цвета пригоден для последующих опытов.

2. Разделение пигментов по методу Крауса

Метод основан на различной растворимости пигментов в спирте и бензине, которые при сливании не смешиваются, образуя два слоя: верхний – бензин; нижний – спирт. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Хлорофилл является сложным эфиром дикарбоновой кислоты хлорофиллина и двух спиртов – метанола и фитола. Фитол имеет длинную углеводородную цепочку (С20Н39), которая и определяет гидрофобность молекулы хлорофилла. Он лучше растворяется в гидрофобном растворителе – бензине. Каротин, будучи углеводородом (С40Н56), также обладает гидрофобными свойствами и имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы – спирты (С40Н56О2), и поэтому они лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.

Ход работы: в пробирку налить 2–3 мл спиртовой вытяжки пигментов и добавить 3–4 мл бензина Калоша (вместо бензина можно использовать петролейный эфир). Пробирку встряхнуть и дать отстояться содержимому. Происходит отслоение эмульсии. Сверху собирается бензин с перешедшими в него хлорофиллами, которые окрашивают данный слой в зеленый цвет. Каротин также находится в бензине, но его желтая окраска маскируется хлорофиллом. Нижний спиртовой слой содержит пигмент ксантофилл, который окрашен в желтый цвет.

Если разделение пигментов происходит недостаточно четко, в пробирку надо добавить 1–2 капли воды и снова сильно встряхнуть ее. Избытка воды следует избегать, так как может произойти помутнение раствора.

Результат работы зафиксировать в виде рисунка.

В заключение следует дать объяснение различной растворимости пигментов в спирте и бензине.

3. Омыление хлорофилла щёлочью

Сложные эфиры способны к реакции со щелочью (реакция омыления), при этом их молекула расщепляется на кислоту и спирт. Из пигментов листа омыляется только хлорофилл, от молекулы которого под влиянием щелочи отщепляются метанол и фитол:

Образующаяся при омылении натриевая соль хлорофиллиновой кислоты сохраняет зеленую окраску, но приобретает гидрофильные свойства, а значит, и большее сродство к спирту. Желтые пигменты при действии щелочи не изменяют своей химической природы.

Ход работы: в пробирку с 2–3 мл вытяжки пигментов добавить 1–2 капли 20%-ного раствора NaОН. Пробирку нагреть на водяной бане до закипания в ней раствора. После охлаждения добавить в пробирку 2–3 мл бензина и 2–3 капли воды (для лучшего разделения смеси). Затем содержимое пробирки сильно встряхнуть и дать отстояться. В пробирке должны присутствовать два слоя: нижний (спиртовый), окрашенный в зеленый цвет; верхний (бензиновый), окрашенный в желтый цвет. В спиртовом слое растворены натриевая соль хлорофиллиновой кислоты и ксантофиллы, окраска которых маскируется хлорофиллом. В бензиновом слое растворен каротин.

В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.

В заключение необходимо объяснить распределение окраски в спиртовом и бензиновом слоях.

4. Получение феофитина и обратное замещение водорода атомом металла

Хлорофилл относится к Mg-порфиринам. Главной частью его молекулы является порфириновое ядро, состоящее из четырех пиррольных колец.

Их вершины с атомами азота направлены к центру порфиринового ядра и взаимодействуют с атомом магния, занимающим центральное положение. Магний в порфириновом ядре удерживается непрочно и при осторожном воздействии сильных кислот может быть замещен на два атома водорода.

Водородзамещенный хлорофилл называется феофитином и имеет бурый цвет:

Водород феофитина можно заменить снова металлом, если подействовать солями меди или цинка; при этом восстанавливается зеленая окраска пигмента. Следовательно, цвет хлорофилла зависит от наличия металлорганической связи в молекуле.

Процесс феофитинизации часто наблюдается в природе и свидетельствует об увеличении проницаемости живых мембран, а значит, о повреждении и гибели клеток.

Ход работы: в две пробирки налить по 2–3 мл спиртового раствора пигментов и прибавить по одной-две капли 10%-ной соляной кислоты. Зеленая окраска раствора переходит в бурую, так как образовался феофитин. Одну пробирку оставить для контроля, во вторую внести небольшой кристаллик уксуснокислой меди и нагреть раствор на водяной бане до кипения. Бурый цвет раствора изменится на зеленый, так как произошло образование хлорофиллпроизводного меди:

В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.

В заключение необходимо объяснить изменение окраски.

Задание 2. Разделение фотосинтетических пигментов методом бумажной хроматографии

Разделение пигментов в настоящем задании основано на различной скорости их продвижения с растворителем. Это обусловлено различной адсорбцией пигментов на бумаге и частично – разной растворимостью в бензине и массой молекул. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Каротин (С40Н56) имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы (С40Н56О2) лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.

Ход работы: приготовить ацетоновую (или спиртовую) вытяжку из свежих листьев любых растений. Навеска растительного материала должна составлять 2–3 г, объем ацетонового экстракта – 25 мл (100%-ный ацетон).

Из хроматографической бумаги вырезать полоску шириной 1,5–2,0 см, длиной 20 см. Держа полоску вертикально, опустить ее кончик на несколько секунд в вытяжку пигментов, налитую в бюксу. При кратковременном погружении вытяжка поднимается по бумаге на 1–1,5 см.

Затем бумагу высушить в токе воздуха и снова погрузить в раствор пигментов. Эту операцию повторить 5–7 раз, пока у верхней границы не образуется полоска ярко-зеленого цвета. После этого нижний конец хроматограммы опустить на несколько секунд в чистый ацетон, чтобы все пигменты поднялись на 1–1,5 см. Таким образом, на бумаге получают окрашенную зону в виде зеленой полоски, где сконцентрирована смесь пигментов, которую необходимо разделить.

Рис. 1. Вид хроматограммы с разделенными пигментами

Хорошо высушенную хроматограмму (до исчезновения запаха ацетона) поместить в строго вертикальном положении в камеру, на дне которой находится чашка Петри с растворителем (смесь бензин:бензол – 1:2), так, чтобы растворитель не касался зоны пигментов. Камеру герметично закрыть. Через 10–15 мин растворитель поднимется на 10–12 см. Смесь пигментов при этом разделится на отдельные компоненты в виде полос, расположенных в следующем порядке: первый снизу – хлорофилл b, над ним – хлорофилл a, затем – ксантофилл (рис. 1). Каротин продвигается вместе с фронтом растворителя быстрее других компонентов, и зона его на бумаге располагается выше всех других пигментов.

Полученную хроматограмму приклеить в тетрадь, обвести зоны пигментов карандашом и подписать.

ИНФОРМАЦИЯ с сайта

Вуз:Сыктывкарский Государственный Университет им. Питирима Сорокина

Понятие: межклеточное пространство