Получение хлорофилла в лабораторных условиях.

Лабораторная работа No 7.
Изучение свойств фотосинтетических пигментов
Цель работы: ознакомиться с методами экстракции пигментов и с их
химическими свойствами.
Задание 1. Химические и оптические свойства пигментов листа
В процессе фотосинтеза высших растений участвуют две группы пигментов: зеленые – хлорофиллы а и b; желтые – каротины и ксантофиллы. Мы познакомимся с методом выделения пигментов, разделения по методу Крауса, с основными химическими и оптическими свойствами пигментов. Работа состоит из отдельных этапов, которые выполняют в приведенной ниже последовательности.

1. Получение спиртового раствора пигментов
   С этой целью можно использовать как сухие листья, так и свежий растительный материал. При работе с сухими листьями рекомендуется увлажнить их перед экстракцией пигментов. При работе с сырым материалом удобны листья герани, гороха, фасоли.
   Для получения большого объема экстракта употребляют высушенные листья крапивы, которые помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл и обваривают кипятком, затем воду сливают. В колбу приливают 100 мл этилового спирта, закрывают ее пробкой с обратным холодильником и ставят на 5 минут на баню с кипящей водой для экстрагирования пигментов. Затем содержимое колбы охлаждают и раствор осторожно декантацией сливают через воронку со складчатым бумажным фильтром. Отфильтрованный раствор используют в последующих опытах. Хранить растворы пигментов следует в темноте в холодильнике.
   Ход работы: 1–2 г листьев герани поместить в фарфоровую ступку, добавить немного кварцевого песка (для лучшего измельчения растительных тканей) и щепотку мела (для создания нейтральной или слабощелочной реакции среды). Листья растереть до однородной массы, в которую добавить 10–15 мл 96%-ного этанола. После тщательного перемешивания гомогенат отфильтровать в пробирку через бумажный фильтр с белой лентой. Чтобы жидкость при выливании из ступки не стекала по стенке, приставить стеклянную палочку к носику ступки, смазанному снаружи вазелином. Ступку и пестик можно ополоснуть несколькими миллилитрами этанола, который надо сливать на этот же фильтр. Работа носит качественный характер; поэтому можно не добиваться полного переноса пигментов в раствор. Если первые порции фильтрата получились мутными, их снова надо профильтровать, не меняя фильтра. Полученный экстракт зеленого цвета пригоден для последующих опытов.
2. Разделение пигментов по методу Крауса
   Метод основан на различной растворимости пигментов в спирте и бензине, которые при сливании не смешиваются, образуя два слоя: верхний – бензин; нижний – спирт. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Хлорофилл является сложным эфиром дикарбоновой кислоты хлорофиллина и двух спиртов – метанола и фитола. Фитол имеет длинную углеводородную цепочку (С20Н39), которая и определяет гидрофобность молекулы хлорофилла. Он лучше растворяется в гидрофобном растворителе – бензине. Каротин, будучи углеводородом (С40Н56), также обладает гидрофобными свойствами и имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы – спирты (С40Н56О2), и поэтому они лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 1 из 4 Ход работы: в пробирку налить 2–3 мл спиртовой вытяжки пигментов и добавить 3–4 мл бензина Калоша (вместо бензина можно использовать петролейный эфир). Пробирку встряхнуть и дать отстояться содержимому. Происходит отслоение эмульсии. Сверху собирается бензин с перешедшими в него хлорофиллами, которые окрашивают данный слой в зеленый цвет. Каротин также находится в бензине, но его желтая окраска маскируется хлорофиллом. Нижний спиртовой слой содержит пигмент ксантофилл, который окрашен в желтый цвет.
   Если разделение пигментов происходит недостаточно четко, в пробирку надо добавить 1–2 капли воды и снова сильно встряхнуть ее. Избытка воды следует избегать, так как может произойти помутнение раствора.
   Результат работы зафиксировать в виде рисунка.
   В заключение следует дать объяснение различной растворимости пигментов в спирте и бензине.
3. Омыление хлорофилла щёлочью
   Сложные эфиры способны к реакции со щелочью (реакция омыления), при этом их молекула расщепляется на кислоту и спирт. Из пигментов листа омыляется только хлорофилл, от молекулы которого под влиянием щелочи отщепляются метанол и фитол:
   Образующаяся при омылении натриевая соль хлорофиллиновой кислоты сохраняет зеленую окраску, но приобретает гидрофильные свойства, а значит, и большее сродство к спирту. Желтые пигменты при действии щелочи не изменяют своей химической природы.
   Ход работы: в пробирку с 2–3 мл вытяжки пигментов добавить 1–2 капли 20%-ного раствора NaОН. Пробирку нагреть на водяной бане до закипания в ней раствора. После охлаждения добавить в пробирку 2–3 мл бензина и 2–3 капли воды (для лучшего разделения смеси). Затем содержимое пробирки сильно встряхнуть и дать отстояться. В пробирке должны присутствовать два слоя: нижний (спиртовый), окрашенный в зеленый цвет; верхний (бензиновый), окрашенный в желтый цвет. В спиртовом слое растворены натриевая соль хлорофиллиновой кислоты и ксантофиллы, окраска которых маскируется хлорофиллом. В бензиновом слое растворен каротин.
   В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.
   В заключение необходимо объяснить распределение окраски в спиртовом и бензиновом слоях.
4. Получение феофитина и обратное замещение водорода атомом металла
   Хлорофилл относится к Mg-порфиринам. Главной частью его молекулы является порфириновое ядро, состоящее из четырех пиррольных колец.
   Их вершины с атомами азота направлены к центру порфиринового ядра и взаимодействуют с атомом магния, занимающим центральное положение. Магний в порфириновом ядре удерживается непрочно и при осторожном воздействии сильных кислот может быть замещен на два атома водорода.
   Водородзамещенный хлорофилл называется феофитином и имеет бурый цвет:
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 2 из 4 Водород феофитина можно заменить снова металлом, если подействовать солями меди или цинка; при этом восстанавливается зеленая окраска пигмента. Следовательно, цвет хлорофилла зависит от наличия металлорганической связи в молекуле.
   Процесс феофитинизации часто наблюдается в природе и свидетельствует об увеличении проницаемости живых мембран, а значит, о повреждении и гибели клеток.
   Ход работы: в две пробирки налить по 2–3 мл спиртового раствора пигментов и прибавить по одной-две капли 10%-ной соляной кислоты. Зеленая окраска раствора переходит в бурую, так как образовался феофитин. Одну пробирку оставить для контроля, во вторую внести небольшой кристаллик уксуснокислой меди и нагреть раствор на водяной бане до кипения. Бурый цвет раствора изменится на зеленый, так как произошло образование хлорофиллпроизводного меди:
   В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.
   В заключение необходимо объяснить изменение окраски.
   Задание 2. Разделение фотосинтетических пигментов методом бумажной хроматографии
   Разделение пигментов в настоящем задании основано на различной скорости их продвижения с растворителем. Это обусловлено различной адсорбцией пигментов на бумаге и частично – разной растворимостью в бензине и массой молекул. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Каротин (С40Н56) имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы (С40Н56О2) лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.
   Ход работы: приготовить ацетоновую (или спиртовую) вытяжку из свежих листьев любых растений. Навеска растительного материала должна составлять 2–3 г, объем ацетонового экстракта – 25 мл (100%-ный ацетон).
   Из хроматографической бумаги вырезать полоску шириной 1,5–2,0 см, длиной 20 см. Держа полоску вертикально, опустить ее кончик на несколько секунд в вытяжку пигментов, налитую в бюксу. При кратковременном погружении вытяжка поднимается по бумаге на 1–1,5 см.
   Затем бумагу высушить в токе воздуха и снова погрузить в раствор пигментов. Эту операцию повторить 5–7 раз, пока у верхней границы не образуется полоска ярко-зеленого цвета. После этого нижний конец хроматограммы опустить на несколько секунд в чистый ацетон, чтобы все пигменты поднялись на 1–1,5 см. Таким образом, на бумаге получают окрашенную зону в виде зеленой полоски, где сконцентрирована смесь пигментов, которую необходимо разделить.
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 3 из 4 Рис. 1. Вид хроматограммы с разделенными пигментами
   Хорошо высушенную хроматограмму (до исчезновения запаха ацетона) поместить в строго вертикальном положении в камеру, на дне которой находится чашка Петри с растворителем (смесь бензин:бензол – 1:2), так, чтобы растворитель не касался зоны пигментов. Камеру герметично закрыть. Через 10–15 мин растворитель поднимется на 10–12 см. Смесь пигментов при этом разделится на отдельные компоненты в виде полос, расположенных в следующем порядке: первый снизу – хлорофилл b, над ним – хлорофилл a, затем – ксантофилл (рис. 1). Каротин продвигается вместе с фронтом растворителя быстрее других компонентов, и зона его на бумаге располагается выше всех других пигментов.
   Полученную хроматограмму приклеить в тетрадь, обвести зоны пигментов карандашом и подписать.
   https://studfiles.net/download.php?id=6321361&code=ceb4fe7793cafaa67b1e2def0484fd99&download-status=process0001 07.07.2019, 9D38 Стр. 4 из 4

Реклама

Роль коэнзим Q10 в #DETOX_LONGEVITY

В тот момент, когда вы откроете интернет и сделаете запрос : «коэнзим Q10”, сразу же, практически с первой минуты, вы увидите информацию, что Израиль, Япония и страны Европы рассматривают это вещество, как перво-очередное средство для профилактики сердечных болезней.

И это так! Но ради справедливости следует заметить, что это вещество работает намного шире, и процессы, которые коэнзим Q10 выравнивает, очень сильно влияют на качество и продолжительность жизни. Об этом и статья!

Рассмотрим понятие — кислородная емкость крови и митохондриальная дисфункция.

Вода смывает “ТОКСИНЫ СТРЕССА”

Во время стресса в организме, в клетках мозга и во всех органах, происходят процессы нервного возбуждения. Если стресс сильный, то электронная-химические процессы между тканями и нейронами (клетками мозга) достигают такой силы, что ведут к #OXYDATIVE_STRESS , а это один из основных механизмов ПРЕЖДЕВРЕМЕННОГО СТАРЕНИЯ, и выбирая с пациентом #ПЛАН_ДОЛГОЛЕТИЕ, мы ОБЯЗАТЕЛЬНО обсуждаем этот пункт.

Во время стресса, а также при напряжении мозга организм работает в ЭКСТРЕННОМ режиме.

Так бывает как при любом виде острого стресса (трагедия, травма), так и, казалось бы, при простых, привычных ситуациях.

При НАПРЯЖЕННОЙ умственной деятельности в течение нескольких часов, как бывает у студентов (лайт-вариант) и на ответственных переговорах (жесть для организма, потому что к ПЕРЕНАПРЯЖЕНИЮ МОЗГА добавляется как минимум беспокойство (или страх)) а также SUPER-ОТВЕТСТВЕННОСТЬ). От этого нервное напряжение резко возрастает. Возрастает скачком.

Для того, чтобы успокоиться нужно включить обратные процессы – процессы торможения.

Этому хорошо способствует простая прохладная вода. Вода как бы успокаивает тело, «охлаждает» его и «смывает» всё лишнее напряжение.
В состоянии стресса рекомендуется пить как можно больше воды. При этом вы можете использовать медитацию. Для этого делайте медленные глотки и представляйте, что вода, которую вы пьёте, проникает в каждую клеточку, успокаивает и расслабляет её, «вымывает» всю вашу грусть, плохое самочувствие, напряжение и отрицательные эмоции и уносит их из организма.

ХЛОРОФИЛЛ: часто задаваемые вопросы.

Комментарии к подборке видео «ХЛОРОФИЛЛ»

Доброго времени суток, мои уважаемые читатели!

Одно из самых информативных видео в подборке, которую я собрала в папке: « материалы для читателей сайта DETOX PRO #drOlgaMatiytso”

здесь ссылка на подборку

ИЗБРАННОЕ для читателей сайта

ссылка на это видео

ПОЛЬЗА ХЛОРОФИЛЛА научные факты

Итак, о каком препарате этот доклад?

Жидкий хлорофилл (Liquid Chlorophyll)

ДОЗА (как принимать?)

В 1 чайной ложке (5 мл) содержится 14,9 мг жидкого хлорофилла, а также натуральное ментоловое масло — 4,35 мг (на официальном сайте пишут — для придания приятного вкуса, но могу сказать, что в исследованиях было показано усиление свойств раствора из-за сочетания хлорофилла из двух растений и ментолового масла — например быстрое облегчение симптомов воспаления слизистой и улучшение всасываемости)

ИТАК:ДОЗА ПРИЁМА

В официальной инструкции написано: минимальная профилактическая дозировка Хлорофилла — по 1 чайной ложке три раза в день за полчаса до основного приема пищи.
В своей медицинской практике я встречала, что люди принимают и по 0,5 ч ложке в день в первый месяц приёма, а затем через месяц вторую порцию добавляют в воду для питья при занятиях спортом и тогда -1 столовую ложку на пол-литра воды.

Был случай, когда пожилая пара была на отдыхе в лесу далеко от цивилизации и у мужа случилась язва на тыле стопы (на фоне сахарного диабета натер ногу — и очень быстро образовалась язва и отек стопы). Три дня они не могли получить квалифицированную помощь и от отчаяния начали принимать хлорофилл с превышением рекомендованной дозы. С 6 столовых ложек в день мужчина почувствовал некоторое облегчение. Ногу удалось спасти. Прошу заметить, Я НЕ НАЗНАЧАЮ ДОЗЫ (консультации могут быть только личные), я привожу этот реальный случай , чтобы иллюстрировать широту возможностей ЖИДКОГО ХЛОРОФИЛЛА

Часто задают вопрос про кратность приёма, можно ли принимать постоянно?

Официальный ответ: да, можно постоянно.

Я с этим согласна.

Есть маленькая ремарка: моя реконструктивная косметология плавно расширилась и дополнилась образованием по медицине анти-старение и я — #ANTI_AGEmedEXPERT и изучаю уже около 10 лет различные ньюансы активного долголетия. И для меня теперь несомненно, что самое полезное вещество НЕЛЬЗЯ ПРИНИМАТЬ В РАЗ И НАВСЕГДА ВЫБРАННОМ РЕЖИМЕ. Важно играть дозами, кратностью и даже сезонностью приёма (это не относиться к лекарствам!!!!!!, но для трав — важное ПРАВИЛО )

КАК ЭТО ДЕЛАТЬ?

Либо 5 дней в неделю принимаете, а в выходные — нет, либо — через день и т.д. АЛГОРИТМОВ ПРИЁМА много, либо прислушивайтесь к себе, иногда мы проводим марафон по само-диагностике, где учим, какие маркёры необходимо обследовать, как и когда (если хотите — ОСТАВЬТЕ ЗАЯВКУ по электронной почте) либо приходите на консультацию, обычно бесплатно сразу после лекции или круглого стола off-line

Постепенно соберу сюда ответы на вопросы с большого числа официальных сайтов, буду добавлять их сюда регулярно, сразу, как будет появляться свободное время, чтобы это видеть — подпишитесь именно на эту статью

Основа долголетия — здоровый кишечник.

Об этом заговорили всего несколько лет назад, хотя сейчас непонятно, почему здоровью желудочно-кишечного тракта придавали так мало значения. Лечили все — сердце, сосуды, суставы, а на кишечник обращали внимание , в большинстве случаев,, только если появлялись боли.

Может быть так обстояли дела потому, что только теперь досконально изучено, как же там, в животе, все функционирует. А ещё в ходе исследований выяснилось, что нет органа, который бы не сбивался, если кишечник работает неправильно.

Также, ОЧЕНЬ важным оказалось, вступив на путь долголетия, уже на первых этапах подключить ПРОГРАММУ РЕАБИЛИТАЦИИ ЖКТ (желудочно-кишечного тракта). А для стойкого эффекта действовать необходимо пошагово и структурно, по разработанному алгоритму.

Основной действующий компонент при работе с таким типом ткани как слизистая желудка или кишечника — ТРАВЫ.

---

Читайте в следующих выпусках обзоры по продукции разных стран, которые имеют отношение к ФИТОТЕРАПИИ желудочно-кишечного тракта.

---

НАЧНУ Я С американской компании NSP

Прошу заметить, я не продаю препараты данной компании. Я пользуюсь их рецептами для себя и для своих близких. И ещё я консультант- эксперт по Anti-Age терапии. Мне подходят препараты данной компании для жизни и для профессии, поэтому я сотрудничаю с NSP

---

подробнее о консультантах NSP

---

Сегодня я пишу про эту компанию в первую очередь, так как считаю ее одной из самых грамотных по работе с травами.

Они работают только с натуральным сырьем, и, самое главное, ПРАВИЛЬНО извлекают из травы активные молекулы (если надо растирать одновременно три корня в строго определенном соотношении, то они так и делают, повторяя древние рецепты, а не облегчая производство менее трудоемкими и значит дешевыми технологиями)

---

Анонсирую также тему: «Активные компоненты разных частей растения. Как извлечь, сочетать, как составлять рецепты.» Помещу в блоге, приглашаю просматривать статьи или подписаться на блог

---

ИТАК: ТРАВЫ NSP

информация с официального сайта компании

Представляем Алгоритм Реабилитации Желудочно-Кишечного Тракта,разработанный в компании NSP.

Автор – кандидат медицинских наук, врач-нутрициолог, научный консультант представительства NSP в Беларуси, Антилевский В. В. Данный алгоритм успешно и широко используется нашими партнерами и доказал свою эффективность.

Всем известно, что здоровье пищеварительной системы – основа здоровья организма в целом. Разработан базовый набор – это та основа, с которой мы начинаем работать, назначая фитопродукты компании NSP. Поэтому компания предложить его (базовый набор) для партнеров компании по специальной цене.

Преимущества работы со базовым набором «Здоровье ЖКТ как ОСНОВА»:  

• целевая аудитория — все люди, стремящиеся к активному долголетию для себя и своих близких
• доказанная эффективность (компания с 1973 года берет в основу разработок только доказанные научные исследования)
• при составлении комплекта учтены также все новейшие знания науки по функционированию ЖКТ на данный момент
• выгодная цена (комплект стоит дешевле) ПОДРОБНЕЕ
• в базовый комплект входят фитопродукты, необходимые с большей частотой (по международной статистике)
• если к базе добавить препараты , учитывая именно Ваши симптомы, то АЛГОРИТМ становится ИНДИВИДУАЛЬНЫМ (как это сделать самостоятельно — см ниже)
• компания сделала обязательной информационную поддержку по работе с Алгоритмом Реабилитации ЖКТ( буклеты, CD, лекции и вебинары)

Стартовый набор включает в себя следующие хиты компании NSP:

• Chlorophyll Liquid (Хлорофилл Жидкий)
• Pau D’ Arco NSP (По Д’ Aрко НСП)
• HP Fighter (Эйч Пи Файтер)
• Caprylic Combination (Комплекс с каприловой кислотой)
• Bifidophilus Flora Force NSP (Бифидофилус Флора Форс НСП)
• Burdock (Репейник)
• Loclo (Локло)

базовый набор NSP
здоровье ЖКТ как основа

СПЕЦИАЛЬНАЯ ЦЕНА (подробнее)

Итак, как же грамотно создать для себя программу реабилитации ЖКТ, чтобы в целом охватить все отделы и учесть индивидуальные особенности именно своего организма? Для этого и создавался данный алгоритм. В нем есть понятие базы – это скелет программы, который необходимо пройти, даже если у Вас нет жалоб (его-то мы и объединили в стартовый набор). А также есть расширения – они необходимы для усиления базы, более эффективной коррекции ЖКТ и стабилизации наименее ее здоровых отделов. Ваша программа будет состоять из 4-х этапов:

• подготовка к реабилитации желудка и 12-перстной кишки
• реабилитация желудка и 12-перстной кишки
• подготовка к реабилитации кишечника
• реабилитация кишечника

Прежде чем начинать составление программы пересмотрите свое питание. Доведите количество выпиваемой воды до 30 мл на 1 кг массы тела в сутки (пить лучше до еды), увеличьте в рационе долю сырых овощей и фруктов, ограничьте количество свободных углеводов (сахар лучше заменить на Stevia). А далее все просто: отвечаете на вопросы левой колонки таблицы и определяете, какие продукты из правой колонки добавляются к базе для поддержки наиболее ослабленных участков ЖКТ. Как видите, все просто. И все же эта простота – ключ к Вашему здоровью. Имея этот ключ, Вы сможете подобрать решение даже к очень сложным задачам, которые ставит перед Вами организм. Прислушайтесь к нему и помогите, и он ответит Вам безграничной благодарностью.

Первый этап

• подготовка к реабилитации желудка и 12-перстной кишки Минимальный курс 10-15 дней

первый этап
АЛГОРИТМ РЕАБИЛИТАЦИИ ЖКТ

---

ПРИМЕЧАНИЯ к первому этапу:

Длительность первого этапа определена с учётом статистики встречаемости симптомов и ответов организма на приём фитопродуктов, и поэтому в БОЛЬШИНСТВЕ СЛУЧАЕВ первый этап именно 10-15 дней. Если симптомы дисфункции выходят за пределы ЖКТ (например избыточный рост дрожже-подобной флоры проявляется «молочницей» на слизистых вне ЖКТ), то алгоритм приёма ФИТОПРОДУКТОВ и (длительность, дозы препаратов и их последовательность) необходимо обсуждать с врачом, который разбирается в подобных препаратах из трав и их сочетании с фарм. препаратами, если это необходимо.

---

P.S. Если желаете скачать PDF алгоритма с комментариями специалистов, то сделайте заявку на электронный адрес или создайте на сайте свой личный кабинет

---

PP.S. Если Вам необходима консультация специалиста, то сделайте заявку также по почте, в личном кабинете или в группе WhatsApp

---

Следующие этапы АЛГОРИТМ РЕАБИЛИТАЦИИ ЖКТ доступен только после ознакомления со всем объемом информации на сайте компании

ПОЛНЫЙ ДОСТУП (подробнее)

КАВАНТУ Жозеф Бьенеме. Рубрика: «История прогресса. Имена.»

КАВАНТУ Жозеф Бьенеме

Имя латиницей: Caventou Joseph Bienaime

Пол: мужской

Дата рождения: 30.06.1795

Место рождения: Сент-Омер, Франция

Дата смерти: 05.05.1877 Возраст (81)

Место смерти: Париж, Франция

Ключевой год: 1834

Жозеф Бьенеме КАВАНТУ

французский химик и токсиколог.

 Окончил Высшую фармацевтическую школу в Париже (1815). 

С 1816 г. работал в лаборатории госпиталя святого Антония, 

в 1826-1859 гг. преподавал в Высшей фармацевтической школе в Париже (с 1834 г. – профессор) и одновременно руководил аптекой. 

Основные научные работы  –.  в области химии природных соединений и фармацевтической химии. Долгое время сотрудничал с П. Ж. Пельтье. 

Они изучали (1817) зеленый пигмент листьев и назвали его хлорофиллом; выделили кретоновую кислоту из кретонового масла (1818) и амбреин из амбры (1820); исследовали (1820) кармин — красящее вещество кошенили. Однако главные их достижения с экстрагированием алкалоидов из растений: они выделили стрихнин (1818), бруцин и верантин (1819), цинхонин и хинин (1820), кофеин (1821, независимо от П. Ж. Робике).

Как открыли хлорофилл?

В 1817 году

ПОДРОБНЕЕ https://mydetoxproes.com/2019/07/07/каванту-жозеф-бьенеме-рубрика-истор/

 

КАВАНТУ Жозеф Бьенеме и Пеллетье Пьер Жозеф выделили из листьев растений зелёный пигмент, который они назвали хлорофиллом^[1].

В 1900-х годах 

Михаил Цвет^[2]

 и Рихард Вильштеттер

независимо обнаружили, что хлорофилл состоит из нескольких компонентов. Вильтштеттер очистил и кристаллизовал два компонента хлорофилла, названные им хлорофиллами а и b и установил брутто-формулу хлорофилла а. В 1915 году за исследования хлорофилла ему была вручена Нобелевская премия. В 1940 Ханс Фишер, получивший в 1930 Нобелевскую премию за открытие структуры гема, установил химическую структуру хлорофилла a. Его синтез был впервые осуществлен в 1960 Робертом Вудвордом^[3], а в 1967 была окончательно установлена его стереохимическая структура^[4].

Лабораторное получение хлорофилла

В этой статье помещаю описание лабораторной работы для студента вуза по биохимии. Мне было интересно вспомнить студенческие годы. А кроме этого, люблю изучать вопрос с разных сторон.

Хлорофилл с 1960 года научились синтезировать 1 в 1, вплоть до пространственной конфигурации молекулы. (об этом будет отдельная статья, позже помещу ссылку или ищите в рубрике ИСТОРИЯ. ИМЕНА.)

Но меня, как врача, радует, что его так легко получать из растительного сырья. Значит этот великолепный препарат всегда будет доступен нам для DETOX и ANTI-AGE терапии в своём самом лучшем, натуральном, БИО-ДОСТУПНОМ виде!

Лабораторная работа № 7.

Изучение свойств фотосинтетических пигментов

Цель работы: ознакомиться с методами экстракции пигментов и с их химическими свойствами.

Задание 1. Химические и оптические свойства пигментов листа

В процессе фотосинтеза высших растений участвуют две группы пигментов: зеленые – хлорофиллы а и b; желтые – каротины и ксантофиллы. Мы познакомимся с методом выделения пигментов, разделения по методу Крауса, с основными химическими и оптическими свойствами пигментов. Работа состоит из отдельных этапов, которые выполняют в приведенной ниже последовательности.

1. Получение спиртового раствора пигментов

С этой целью можно использовать как сухие листья, так и свежий растительный материал. При работе с сухими листьями рекомендуется увлажнить их перед экстракцией пигментов. При работе с сырым материалом удобны листья герани, гороха, фасоли.

Для получения большого объема экстракта употребляют высушенные листья крапивы, которые помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл и обваривают кипятком, затем воду сливают. В колбу приливают 100 мл этилового спирта, закрывают ее пробкой с обратным холодильником и ставят на 5 минут на баню с кипящей водой для экстрагирования пигментов. Затем содержимое колбы охлаждают и раствор осторожно декантацией сливают через воронку со складчатым бумажным фильтром. Отфильтрованный раствор используют в последующих опытах. Хранить растворы пигментов следует в темноте в холодильнике.

Ход работы: 1–2 г листьев герани поместить в фарфоровую ступку, добавить немного кварцевого песка (для лучшего измельчения растительных тканей) и щепотку мела (для создания нейтральной или слабощелочной реакции среды). Листья растереть до однородной массы, в которую добавить 10–15 мл 96%-ного этанола. После тщательного перемешивания гомогенат отфильтровать в пробирку через бумажный фильтр с белой лентой. Чтобы жидкость при выливании из ступки не стекала по стенке, приставить стеклянную палочку к носику ступки, смазанному снаружи вазелином. Ступку и пестик можно ополоснуть несколькими миллилитрами этанола, который надо сливать на этот же фильтр. Работа носит качественный характер; поэтому можно не добиваться полного переноса пигментов в раствор. Если первые порции фильтрата получились мутными, их снова надо профильтровать, не меняя фильтра. Полученный экстракт зеленого цвета пригоден для последующих опытов.

2. Разделение пигментов по методу Крауса

Метод основан на различной растворимости пигментов в спирте и бензине, которые при сливании не смешиваются, образуя два слоя: верхний – бензин; нижний – спирт. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Хлорофилл является сложным эфиром дикарбоновой кислоты хлорофиллина и двух спиртов – метанола и фитола. Фитол имеет длинную углеводородную цепочку (С20Н39), которая и определяет гидрофобность молекулы хлорофилла. Он лучше растворяется в гидрофобном растворителе – бензине. Каротин, будучи углеводородом (С40Н56), также обладает гидрофобными свойствами и имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы – спирты (С40Н56О2), и поэтому они лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.

Ход работы: в пробирку налить 2–3 мл спиртовой вытяжки пигментов и добавить 3–4 мл бензина Калоша (вместо бензина можно использовать петролейный эфир). Пробирку встряхнуть и дать отстояться содержимому. Происходит отслоение эмульсии. Сверху собирается бензин с перешедшими в него хлорофиллами, которые окрашивают данный слой в зеленый цвет. Каротин также находится в бензине, но его желтая окраска маскируется хлорофиллом. Нижний спиртовой слой содержит пигмент ксантофилл, который окрашен в желтый цвет.

Если разделение пигментов происходит недостаточно четко, в пробирку надо добавить 1–2 капли воды и снова сильно встряхнуть ее. Избытка воды следует избегать, так как может произойти помутнение раствора.

Результат работы зафиксировать в виде рисунка.

В заключение следует дать объяснение различной растворимости пигментов в спирте и бензине.

3. Омыление хлорофилла щёлочью

Сложные эфиры способны к реакции со щелочью (реакция омыления), при этом их молекула расщепляется на кислоту и спирт. Из пигментов листа омыляется только хлорофилл, от молекулы которого под влиянием щелочи отщепляются метанол и фитол:

Образующаяся при омылении натриевая соль хлорофиллиновой кислоты сохраняет зеленую окраску, но приобретает гидрофильные свойства, а значит, и большее сродство к спирту. Желтые пигменты при действии щелочи не изменяют своей химической природы.

Ход работы: в пробирку с 2–3 мл вытяжки пигментов добавить 1–2 капли 20%-ного раствора NaОН. Пробирку нагреть на водяной бане до закипания в ней раствора. После охлаждения добавить в пробирку 2–3 мл бензина и 2–3 капли воды (для лучшего разделения смеси). Затем содержимое пробирки сильно встряхнуть и дать отстояться. В пробирке должны присутствовать два слоя: нижний (спиртовый), окрашенный в зеленый цвет; верхний (бензиновый), окрашенный в желтый цвет. В спиртовом слое растворены натриевая соль хлорофиллиновой кислоты и ксантофиллы, окраска которых маскируется хлорофиллом. В бензиновом слое растворен каротин.

В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.

В заключение необходимо объяснить распределение окраски в спиртовом и бензиновом слоях.

4. Получение феофитина и обратное замещение водорода атомом металла

Хлорофилл относится к Mg-порфиринам. Главной частью его молекулы является порфириновое ядро, состоящее из четырех пиррольных колец.

Их вершины с атомами азота направлены к центру порфиринового ядра и взаимодействуют с атомом магния, занимающим центральное положение. Магний в порфириновом ядре удерживается непрочно и при осторожном воздействии сильных кислот может быть замещен на два атома водорода.

Водородзамещенный хлорофилл называется феофитином и имеет бурый цвет:

Водород феофитина можно заменить снова металлом, если подействовать солями меди или цинка; при этом восстанавливается зеленая окраска пигмента. Следовательно, цвет хлорофилла зависит от наличия металлорганической связи в молекуле.

Процесс феофитинизации часто наблюдается в природе и свидетельствует об увеличении проницаемости живых мембран, а значит, о повреждении и гибели клеток.

Ход работы: в две пробирки налить по 2–3 мл спиртового раствора пигментов и прибавить по одной-две капли 10%-ной соляной кислоты. Зеленая окраска раствора переходит в бурую, так как образовался феофитин. Одну пробирку оставить для контроля, во вторую внести небольшой кристаллик уксуснокислой меди и нагреть раствор на водяной бане до кипения. Бурый цвет раствора изменится на зеленый, так как произошло образование хлорофиллпроизводного меди:

В конце работы зарисовать картину разделения пигментов после омыления хлорофилла.

В заключение необходимо объяснить изменение окраски.

Задание 2. Разделение фотосинтетических пигментов методом бумажной хроматографии

Разделение пигментов в настоящем задании основано на различной скорости их продвижения с растворителем. Это обусловлено различной адсорбцией пигментов на бумаге и частично – разной растворимостью в бензине и массой молекул. Эмпирическая формула хлорофилла a – С55Н72О5N4Mg, хлорофилла b – С55Н70О6N4Mg. Каротин (С40Н56) имеет большое сродство с бензином. Ксантофиллы (С40Н56О2) лучше растворяются в этаноле, чем в бензине.

Ход работы: приготовить ацетоновую (или спиртовую) вытяжку из свежих листьев любых растений. Навеска растительного материала должна составлять 2–3 г, объем ацетонового экстракта – 25 мл (100%-ный ацетон).

Из хроматографической бумаги вырезать полоску шириной 1,5–2,0 см, длиной 20 см. Держа полоску вертикально, опустить ее кончик на несколько секунд в вытяжку пигментов, налитую в бюксу. При кратковременном погружении вытяжка поднимается по бумаге на 1–1,5 см.

Затем бумагу высушить в токе воздуха и снова погрузить в раствор пигментов. Эту операцию повторить 5–7 раз, пока у верхней границы не образуется полоска ярко-зеленого цвета. После этого нижний конец хроматограммы опустить на несколько секунд в чистый ацетон, чтобы все пигменты поднялись на 1–1,5 см. Таким образом, на бумаге получают окрашенную зону в виде зеленой полоски, где сконцентрирована смесь пигментов, которую необходимо разделить.

Рис. 1. Вид хроматограммы с разделенными пигментами

Хорошо высушенную хроматограмму (до исчезновения запаха ацетона) поместить в строго вертикальном положении в камеру, на дне которой находится чашка Петри с растворителем (смесь бензин:бензол – 1:2), так, чтобы растворитель не касался зоны пигментов. Камеру герметично закрыть. Через 10–15 мин растворитель поднимется на 10–12 см. Смесь пигментов при этом разделится на отдельные компоненты в виде полос, расположенных в следующем порядке: первый снизу – хлорофилл b, над ним – хлорофилл a, затем – ксантофилл (рис. 1). Каротин продвигается вместе с фронтом растворителя быстрее других компонентов, и зона его на бумаге располагается выше всех других пигментов.

Полученную хроматограмму приклеить в тетрадь, обвести зоны пигментов карандашом и подписать.

ИНФОРМАЦИЯ с сайта

Вуз:Сыктывкарский Государственный Университет им. Питирима Сорокина

Хлорофилл устраняет запах пота.

Заметили ли Вы, что у здорового или правильно настроенного организма пот почти не имеет запаха? Спортсмен, пробежавший несколько километров, становится обладателем прекрасной физической формы и влажной футболки, и запах его, конечно, усиливается, но не намного, и, самое главное, ничем неприятным не пахнет.

Понятие: межклеточное пространство